蛹虫草菌种(蛹虫草液体菌种的制备方法)

蛹虫草液体菌种的制备方法

一、培养基配方

配方为:玉米粉1%，葡萄糖2%，蛋白胨1%，酵母粉0.5%，磷酸二氢钾0.1%，水935%，硫酸镁0.05%，维生素B1 10mg，PH值调至5左右。

二、生产和栽培方法

制作一级摇瓶:将这些原料溶于水中，放入500ml三角瓶中，每个三角瓶200ml，放入3颗左右玻璃珠，塞上棉塞，然后用4层纱布覆盖棉塞，将瓶口扎紧，放入高压灭菌器中消毒。当压力表升至0.5kg/cm2时，清洁空气，然后关闭放气阀，直到温度计指针降至0。

接种方法:首先将灭菌后的蛹虫草液体培养基放在超净工作台上，将蛹虫草母种和接种挂钩、酒精灯、酒精棉球等接种物品放在超净工作台上，将工作服挂在接种室进行消毒。然后点燃接种室的气雾剂(最好用臭氧消毒器)，立即关闭所有门窗进行密闭消毒，打开紫外线灯。40分钟后，烟雾散去，紫外线灯关闭，接种人员可以接种疫苗。接种方法是穿上工作服，打开洁净工作台风扇，打开酒精灯，左手握住母管对准火焰口，右手握住铁钩，立即放入母管3-5秒，然后将菌种分成5-7段，再用左手迅速打开纱布瓶盖， 并立即用右手将一段菌钩入瓶中(每瓶插入5-6片0.5平方厘米的菌种)，并迅速按原样盖上瓶盖。

蛹虫草菌种接入后，移入22-24℃的恒温培养室，在摇床上摇床培养菌种。摇床的转速为140转/分钟。经过4-6天的产卵培养，蛹虫草液体颜色清晰，菌球密集，瓶口有蛹虫草的气味，可以判断该菌株为优良菌株。如果发现瓶内细菌浓度低，气味难闻，有五颜六色的菌液，则为杂菌污染，一定不能使用。

制作二级摇瓶:培养基为同一级别，蛹虫草液体菌种2000毫升装于5000毫升三角瓶中，灭菌冷却后，一级摇瓶按10%无菌操作放入大摇瓶中，在22-24℃、140转/分钟下振荡培养72小时后，菌球大小均匀，密度在80%

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